HPLC o espectrometría de masas: qué demuestra de verdad cada prueba de un péptido

La mayoría de los certificados de péptidos muestran una cifra de pureza, a menudo del 98% o el 99%. Esa cifra suele salir de la HPLC. Es útil, pero por sí sola puede llevar a engaño.

Qué hace la HPLC

La cromatografía líquida de alta resolución hace pasar una muestra disuelta por una columna. Las distintas moléculas salen en momentos distintos y aparecen como picos en un gráfico. La cifra de pureza es el tamaño del pico principal comparado con el de todos los picos. La HPLC le dice que la muestra es, en su mayor parte, una sola cosa. No le dice, por sí misma, qué es esa cosa.

Qué hace la espectrometría de masas

La espectrometría de masas mide la masa de las moléculas de la muestra. Cada péptido tiene una masa conocida, así que una coincidencia entre la masa medida y la esperada confirma la identidad. Los laboratorios suelen combinar las dos (LC-MS) para identificar directamente el pico principal de la HPLC.

Para encontrar la masa esperada con la que comparar un COA, puede usar la calculadora de peso molecular de péptidos de Codex Research Lab.

Por qué conviene tener las dos

Un vial puede tener un 99% de pureza y ser el péptido equivocado. Un vial puede ser el péptido correcto con una pureza baja. Solo las dos pruebas juntas responden ambas preguntas. Ninguna de las dos mide las endotoxinas ni cuánto péptido hay en el vial, que necesitan pruebas aparte.

Para la lista completa de comprobaciones, vea cómo leer un COA.